威尼·至尊国际(中国)

1. 细胞类样本

• 样本类型	送样量	样本保存和运输	注意事项
  悬浮细胞	>2×106 /单文库，建议送备份。	-80°C保存，干冰运输。	细胞送样前需自行交联固定；贴壁细胞送样前需消化成悬浮细胞固定后送样。
  悬浮细胞处理方法： （1）取出悬浮细胞，显微镜下观察，确定生长状态是否良好，是否有细菌污染； （2）使用显微镜或荧光细胞计数仪计数，检测对数期细胞的活性和数量，建议活性>90%，细胞所需量:至少2.0×106个/单个Hi-C文库，根据构建文库数推算所需细胞量； （3）在新鲜培养的状态下进行甲醛交联，交联过程操作需要在超净工作台中进行，所需试剂：37%Formaldehyde(Sigma:F8775-4X25ML）、Glycine(Amresco:0167-1kg）； 细胞固定流程： （1）细胞计数后在10ml完全培养基（80%1640，20%胎牛血清）中重悬后加入571μl 37%Formaldehyde（甲醛，终浓度2%），室温固定10min（每1-2min上清颠倒一次混匀）； （2）加入894μl 2.5M Glycine（甘氨酸）溶液，轻微晃动培养瓶/皿，保证甲醛和甘氨酸充分混匀，培养基由粉红色变为亮⻩色，室温终止固定10min，冰上放置15min； （3）样品溶液400g，4°C离心5min，弃上清； （4）500μl PBS重悬细胞沉淀后移至1.5ml离心管中；400g，4°C离心5min，弃上清；再加入500μl PBS重悬细胞沉淀，400g，4°C离心5min，弃上清，使用封口膜密封离心管口，放在-80°C保存。 附：2.5M Glycine配制方法
  注意事项： （1）冻存细胞需经复苏或一段时间细胞培养后再进行细胞交联，公司不给予细胞复苏或培养； （2）为避免实验操作而引起细胞损失，建议使用低吸附离心管和移液器枪头。

2. 动物组织

• 样本类型	送样量	样本保存和运输
  动物组织	常规组织：500mg/份 备份1-2份 特殊组织类型需评估	置于密封袋中，液氮速冻，干冰运输。
  动物组织处理方法： （1）取新鲜的动物组织，迅速用预冷的 0.9%生理盐水漂洗将组织表面残留的血液冲洗干 净，并剔除结缔组织和脂肪组织等非研究组织； （2）若组织体积较大，尽量将样品在冰上分割 500mg 左右的组织块，防止样品降解； （3）将处理好的组织样本保存于冻存管中，盖好螺旋盖，封口膜封口，准确标记，放入 液氮中速冻 10min；液氮速冻之后，转至-80°C 保存，干冰运输。 注意：不建议将样品直接保存于密封袋或不带螺纹旋盖的 EP 管中：密封袋经过液氮速 冻后变脆易破裂，易导致样品交叉污染；不带螺纹旋盖的 EP 管容易渗入液氮，导致管 内体积膨胀爆管。

3. 植物组织

• 样本类型	送样量	样本保存和运输
  植物组织	幼嫩组织（叶片等）：1g 常规冻存组织：3g 备份1-2份 特殊组织类型需评估	置于密封袋中，液氮速冻，干冰运输。 建议选取幼嫩的叶片。
  植物组织处理方法： （1）从植物体上取下新鲜组织，用灭菌水将材料表面的灰尘或泥土冲洗干净，吸干； （2）如果组织体积较大，应在冰上将组织剪切成 5 cmX2 cm 左右小块或薄片，然后放 入50 ml带有螺旋盖的冻存管或锡箔纸中，准备标记样本名称； （3）立即浸入液氮中速冻10 min，之后保存于-80℃冰箱； 注意：植物多含有次生代谢物或多糖多酚，存在较高失败率，因此一定要选取幼嫩叶片。

4. 其他类型样本

• 样本类型	送样量
  全血	需要分离出细胞，按细胞要求送样。
  	直接送全血 样本量：分哺乳动物和非哺乳动物，哺乳动物 1 个库最少 1ml，非哺乳动物 1 个库最少 500ul，建议送备份样本。 送样建议：取血液于紫色 EDTA 抗凝管中，用抗凝管取血后，画 8 字，轻柔摇晃 6 次， 充分混匀，液氮速冻，速冻时可以放到 50ml 管里以免抗凝管冻裂，干冰送样即可。

5. 注意事项

6. 样本打包及寄送建议

• 6.1 样本的打包

  （1）核酸样品建议使用质量好的1.5ml或2ml 低吸附EP管装载样品，并用封口膜封口。为了防止样品管破裂，或者污染和混乱，请不要使用诸如PCR管、0.5ml EP管、八联管、96孔板、深孔板等非标准管送样。非标准管不利于样品保存以及后续实验的进行。如有样品使用非标准管制备，还请在送样前自行转管处理。
  （2）组织样本建议根据送样量使用合适规格带螺纹帽的EP管、冻存管或者离心管装载组织样品，并用封口膜封口。
  （3）为防止样品管在运输过程中受到干冰挤压破裂，最好将样品管放到50ml离心管或其他支撑物中，并在支撑物里添加棉花或卫生纸缓冲。大量样品建议将EP管放置在冻存盒中，并在冻存盒外面包裹气泡垫。如使用锡箔纸、自封袋装载的样品，为防止运输中受挤压破损，建议将锡箔纸折叠整齐装在自封袋中，在样品包装外再用气泡垫包好并固定。
  （4）对于血液样品，建议采用5-10ml 塑料抗凝采血管装载，为了防止运输过程中采血管因挤压而损坏，需要将每支采血管管身均用气泡垫包好，然后放置到塑料或纸质包装盒中。
  （5）用乙醇沉淀的样品由于运输中会有少量乙醇挥发出，建议将样品管盖用封口膜缠绕4-5圈。
  （6）为便于处理和保存，组织样品送样量请不要超过建议送样量的5倍（特殊的得率较低的样品除外）。

• 6.2 样本的名称标识

  （1）所有的样品必须具有清晰的标记，并且简洁明了。
  （2）使用锡箔纸包装的组织样品建议在锡箔纸内外均标记样品名称，并将锡箔纸放在自封袋中，自封袋外面再标记上样品名称，防止锡箔纸上样品名称模糊引起样品混乱。
  （3）使用乙醇沉淀的核酸样品，由于挥发出的乙醇会使记号笔的标记模糊，建议用油性记号笔将样品名称写在标签纸上，然后用透明胶带将标签纸粘贴在样品管壁上，并缠绕2-3圈。
  （4）样品名称建议使用“字母+数字”命名方式标注在管盖。其他信息如日期、浓度、物种等可标注在管壁。所有标注内容需与《样品信息单》保持一致。